В то время как морфологические наблюдения Т. Gondii инфекции в кишечном эпителии кошек и ооцист в фекалиях обеспечивают основу для полового цикла, ключевые механистические детали, таких как половая дифференциации / определение и recombi нации требуют создания генетики передачи. Ранние работы по Pfefferkorn и его коллегам заложили основу для Т. гондий как генетическая модель организм путем создания необходимых инструментов, что делает ключевые наблюдения и проведения первых генетические крестов. Выполнение генетических крестов Т. гондий является относительно сложным и не легко проводится в большинстве лабораторий, отчасти из-за биологической опасности, исходящей от ооцист. Эти этапы являются стойкими к воздействию химическим обработкам и дезинфицирующим средствам (т.е. Chlo-Rine, альдегид фиксация, сильные кислоты или оснований, УФ-облучение). Тепловая инактивация является единственным RELI-способные средства дезинфекции поверхностей, которые вступают в контакт с Т. Gondii ооцист (Dubey, 1998). Другие этапы Т. гондий (тахизоиты и bradyzoites) могут быть использованы с типичной BL-2 уровня сдерживания, что делает их относительно легко работать в лаборатории. Успешное завершение генетического креста требует производств тканевых цистых два совместимых родительских штаммов, как правило, путем chroni-тический заражающий мышеем, совместного кормление ткани кист до конкретного патогена котят, сбор ооциста пролил в кале, споруляция, повторно -initiation культур в пробирке, клонирование и фенотипирования прог-Eny. Не удивительно, что количество крестов, которые были проведены было очень ограниченно, хотя результаты были весьма информативны. Gondii ооцисты (Dubey, 1998). Другие этапы Т. гондий (тахизоиты и bradyzoites) могут быть использованы с типичной BL-2 уровня сдерживания, что делает их относительно легко работать в лаборатории. Успешное завершение генетического креста требует производств тканевых цистых два совместимых родительских штаммов, как правило, путем chroni-тический заражающий мышеем, совместного кормление ткани кист до конкретного патогена котят, сбор ооциста пролил в кале, споруляция, повторно -initiation культур в пробирке, клонирование и фенотипирования прог-Eny. Не удивительно, что количество крестов, которые были проведены было очень ограниченно, хотя результаты были весьма информативны. Gondii ооцисты (Dubey, 1998). Другие этапы Т. гондий (тахизоиты и bradyzoites) могут быть использованы с типичной BL-2 уровня сдерживания, что делает их относительно легко работать в лаборатории. Успешное завершение генетического креста требует производств тканевых цистых два совместимых родительских штаммов, как правило, путем chroni-тический заражающий мышеем, совместного кормление ткани кист до конкретного патогена котят, сбор ооциста пролил в кале, споруляция, повторно -initiation культур в пробирке, клонирование и фенотипирования прог-Eny. Не удивительно, что количество крестов, которые были проведены было очень ограниченно, хотя результаты были весьма информативны. Успешное завершение генетического креста требует производств тканевых цистых два совместимых родительских штаммов, как правило, путем chroni-тический заражающий мышеем, совместного кормление ткани кист до конкретного патогена котят, сбор ооциста пролил в кале, споруляция, повторно -initiation культур в пробирке, клонирование и фенотипирования прог-Eny. Не удивительно, что количество крестов, которые были проведены было очень ограниченно, хотя результаты были весьма информативны. Успешное завершение генетического креста требует производств тканевых цистых два совместимых родительских штаммов, как правило, путем chroni-тический заражающий мышеем, совместного кормление ткани кист до конкретного патогена котят, сбор ооциста пролил в кале, споруляция, повторно -initiation культур в пробирке, клонирование и фенотипирования прог-Eny. Не удивительно, что количество крестов, которые были проведены было очень ограниченно, хотя результаты были весьма информативны.
Как и с другими генетическими модельными организмами, T. гондий линии с мутантными фенотипами, такие как лекарственная устойчивость и температурной чувствительность должны была быть
374 РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ В классической генетике токсоплазма
генерируется в качестве инструментов для генетических скрещиваний. Эти шпильки-х года использовали тот факт, что Т. гондий тахизоиты гаплоидны и могут поддерживаться на неопределенное время в пробирке и криоконсервации, тем самым способствуя выделением определенных клонов (Пфефферкорн, 1988). В частности, экран для чувствительной к температуре (TS) мутантов польза от этого, как чувствительность к температуре и в других генетических моделях, как правило, рецессивный признак (Пфефферкорн и Пфефферкорн, 1976). Теософского мутанты, отобранные после паразитов RH были подвергнуты N-метил-NN'нитро-N-nitrosoguani-дина, были способны образовывать бли шки только в Permis-Sive температуре 33°С, а не при 40°C. Теософской линия тестируемая у мышей была значительно менее вирулентным, чем родительский штамм, высоко вирулентный штамм RH (позже показан, что прототип для I линии типа), в соответствии с ингибированием роста во время лихорадочного ответа. Хотя только один TS линия показала очевидные реверсии, низкую скорость восстановления мутантов в целом (1,4 процента выживших после мутагенеза) утверждает, что большинство мутантов TS восстановленных было обусловлены одиночными поражения. Выбранные линии TS варьировались в их оптимальной температуре роста и способности оставаться заразными при 40°С, предполагая, что генетическая основа для дефектов роста были различны для каждой линии. Для сравнения, экран для устойчивости к препарату 5-fluorodeoxyuridine (FudR) (Pfefferkorn и Pfefferkorn, 1977а, 1979), ориентированные один ген, кодирующий сэлвиджа фермента урацила фосфорибозилтрансферазы, previ-ously характеризуется от спонтанного мутанта (Pfefferkorn и Pfefferkorn, 1977b; Pfefferkorn, 1978). Для восстановления ФУДР-устойчивых мутантов, были найдены алкилирующие агенты, чтобы быть наиболее эффек-Cient мутагены (Пфефферкорн и Пфефферкорн, 1979). Результаты этих исследований показали, что мутанты с выбираемыми фенотипами могут быть легко восстановлены, открывая возможность использовать генетические кресты и рекомбинацию для изучения генетической основы для биологически значимых фенотипов, таких как лекарственная устойчивость.
Для первого креста Т. гондия, две мутантных линии, устойчивые к аденинарабинозиду (AraA) и FudR были по отдельности выбраны из родительского штамма C (также известный как КТГ, CEP) после химической mutage-Несис (Pfefferkorn и Pfefferkorn, 1980). Штамм CTG был выделен из естественно зараженной кошки в
Нью-Гемпшир Элмер Pfefferkorn (Пфефферкорн и др., 1977), а позже было установлено, что в состав III типа линии. Несколько клонов были RECOV-Ered, и линия устойчива к каждому препарату была выбрана для тестирования. Клоны, резистентные к AraA или ФУДР были независимо друг от друга в состоянии пройти через кошку и пролить ооцист. Все 116 ооциста полученные клоны, выделенные из AraA устойчивых к линии были лекарственной устойчивостью. Это подтвердил гаплоидный характер паразита и производство как микро- и macrogametocytes. Когда примерно равное количество AraA-устойчивых и ФУДР-резистентных bradyzoites подавали кошки, приблизительно 12 процентов клонов восстановленных были устойчивы к обоим препаратам. Этот показатель дважды устойчивых клонов наблюдалось в двух отдельных экспериментах и согласуется с ожидаемой доходности мейоза рекомбинации, при условии, что половина все оплодотворения будет само-оплодотворение, а из остального поперечного оплодотворения 25 процентов потомства, как ожидается, будет вдвойне устойчивы - следовательно, 12,5 процента в целом. Этот расчет предполагает, эти маркеры должны быть несвязанным то, что впоследствии было подтверждено картографирования связь шпилька-х годов прошлого века. Эти данные доказывают, что типы спаривания не предопределены и что партеногенез по существу не способствует выходу ооциста во время экспериментальных скрещиваний.