Апикальной комплекс Toxoplasma участвует в секреции соединений, которые играют ключевую роль в инвазии хост-клеток и выживание во время инфекции. Эти соединения являются производными не только от rhoptries, но и из плотных гранул и micronemes. Анализ биоинформатики генома Т. гондий показывает более 800 генов, кодирующих белки с предполагаемыми секреторными сигнальными пептидами (Zhou и др., 2005). Хотя многие из этих предполагаемых секреторных белков, вероятно, будут связаны только с внутренними органелл, substan-TiAl доля может быть экспортирована наружно для взаимодействия с хостом. До недавнего времени лишь ограниченное число таких секреторных белков не было обнаружено, и более широкий спектр этих молекул, предположительно связанными с вторжением паразитов и выживанией оставался неизвестным. Эти белки, известный как выделительные / секреторный антиген (ESA) белки, по своей природе являются растворимым, и, таким образом, идеально подходят для отображения и идентификации с помощью 2-DE. Чжоу и сотрудники были недавно применены протеомики технологии, чтобы анализировать большое когорту свободно выпущенных Toxoplasma секреторных белков с использованием дополнительных методик 2-DE и жидкостной хроматографии ESI-MS / MS (MudPIT) (Zhou и др., 2005).
Суб-протеом ЕКА белков могут быть легко получены из тахизоитов путем разделения пара-сайты из клеток-хозяев и инкубации их в среде, содержащей 1% этанола до ConCentra-ного и протеомики анализа. Сопоставление этих ЕССА секреторных продуктов на 2-DE показало Approxi-100 пятен счета, большинство из которых были успешно идентифицированных белок микро-последовательностью или MALDI-MS. Разделение ESA белков на 2-DE гелей ясно показали, что многие белки присутствовали в
несколько видов, предполагая, что они подвергаются существенной посттрансляционной модификации (PTM), хотя природа и значение этого PTMs остаются разъяснены (Zhou и др., 2005).
Анализ MudPIT протеомики того же секреторной фракции показали несколько дополнительных белков, в том числе новых предполагаемых адгезивных белков, протеаз, и гипотетических секреторных белков, подобных продуктов, выраженных другими связанными паразитов, в том числе Plasmodium (Zhou и др., 2005). Как и при анализе rhoptry белков (Bradley и соавт., 2005), Чжоу и сотрудники CHARAC-зуется подмножество этих новых белков ESA путем локализации экспериментов, на этот раз вновь выразить их в виде слитых до желтого флуоресцентного белка. Этот экран выявил общие и различные локализаций в пределах секреторных отсеков Т. гондий тахизоитов, подтверждающие гипотезу о том, что эти белки были действительно полученный из этих секреторных органелл. Это протеомика исследование значительно расширило наше понимание ЕССА белков Toxoplasma таким образом, что было бы трудно достичь с помощью классических методов. Интересно, что только одна из 38 новых rhoptry белков, определенных Брэдли и его сотрудниками было обнаружено в ЕКА фракции Zhou и его сотрудников. Эта чрезвычайно небольшое перекрытие между двумя суб-протеомов является демонстрацией чистоты соответствующих препаратов образца, и свидетельствует о важности хорошей подготовки проб при проведении суб-протеомики исследования.
ДРУГАЯ SUB-Протеом
ИССЛЕДОВАНИЯ Т. гондий
По существу, любой отсек или суб-протеом из Toxoplasma могут быть изучены, обеспечивая материал достаточного количества и качества могут быть получены и каким-либо способом проверки, такие как immunolocal-лизации, могут быть использованы. К сожалению, некоторые из этапов жизни Т. гондия, для которых анализ протеомики бы оказаться наиболее биологически интересным, такими как сексуальные стадии, которые происходят исключительно в кишечнике кошки, являются одними из наиболее трудно получить и подготовить соответствующий материал с. Протеомики исследования цитоскелета а
556 ПРОТЕОМИКА OF токсоплазма
внутренний мембранный комплекс Т. Gondii тахизоитами В настоящее время проводятся (Wastling, неопубликованные), и многие другие подобные исследования уверены, чтобы следовать в ближайшие годы. 2-DE отображение, в частности, раскрывает огромную сложность экспрессии генов в Т. гондий, что указывает, в какой степени изоформы белков являются общей чертой экспрессии белка, а также степень, до которой посттрансляционные модификации имеют в протеомом. Так, например, 2-DE анализ цитоскелета показывает большие и сложные семейства альфа- и бета-тубулина, миозина и мембраны скелетных белков среди других (Wastling, unpub-неопубликованными). Характер посттрансляционного Моди-Г-модификация, которые приводят к этой сложности в настоящее время совершенно неизвестен. Такие модификации могут быть функционально важным,
ДИНАМИЧЕСКИЙ Протеом
Т. гондий
До сих пор мы говорили на протеом токсоплазмов, как если бы были относительно стабильной сущности, а как его геном. Все протеомы в действительности очень динамичны, и отражают биологический контекст клетки во время анализа. Вместо того, чтобы пры-кий помеха, это явление может быть превращено в нашу пользу, так что анализ сравнительной протеомики может быть использован в качестве инструмента для характеристики биологической активности паразита. Таким образом, анализ протеомики может быть использован, чтобы помочь при самоприготовлении важных аспектов биологии Т. гондий, таких как изменения, которые происходят от одного жизненного этапа к другому и анализу ген нокаутных фенотипов и факторов вирулентности, а также для изучение действия химиотерапевтических агентов и основы лекарственной устойчивости.