в разных условиях опыта, мкм3
| СОЯ | ПВЯ | ||||
| Группа крыс | Объём | Объём | Объём | Объём | |
| нейронов | ядер | нейронов | ядер | ||
| Интактная | 4100 ± 150 | 610 ± 19 | 3200 ± 110 | 420 ± 12 | |
| С персистирующим эструсом | 4700 ± 170 | 750 ± 20 | 3560 ± 140 | 490 ± 16 | |
| С анэструсом | 3600 ± 140 | 550 ± 17 | 2800 ± 120 | 375 ± 12 | |
| 4а | Освечивание интактного животного (5 сеансов) | 4850 ± 190 | 780 ± 19 | 3450 ± 160 | 460 ± 15 |
| 4б | То же (10 сеансов) | 4910 ± 210 | 880 ± 21 | 3550 ± 130 | 470 ± 18 |
| 5а | Освечивание на фоне персистирующего | 5200 ± 185 | 800 ± 19 | 4000 ± 160 | 520 ± 21 |
| эструса (5 сеансов) | |||||
| 5б | То же (10 сеансов) | 5600 ± 220 | 780 ± 18 | 4100 ± 160 | 610 ± 22 |
| 6а | Освечивание на фоне анэструса (5 сеансов) | 4050 ± 150 | 610 ± 14 | 3000 ± 100 | 410 ± 14 |
| 6б | То же (10 сеансов) | 4150 ± 170 | 650 ± 15 | 3200 ± 120 | 480 ± 17 |
В 6-й группе крыс на фоне анэструса лазерное освечивание способствовало восстановлению активности ГГНС. Депонирование секрета сменялось состояни-ем его умеренного выведения. Морфометрические параметры нейросекреторных ядер гипоталамуса (СОЯ, ПВЯ) приближались к контрольным значениям. При десятидневном сроке освечивания описанные морфологические изменения ак-тивности ГГНС были ещё более отчётливыми.
Дальнейшая стимуляция гормонозависимых образований освечиванием НИЛИ
(15 дней) приводила к функционально-морфологическим перестройкам, демонс-трирующим начало развития патогистологических изменений в нейросекретор-ных элементах (резкая гиперемия сосудов, явления дегенерации, пикноз нейро-секреторных клеток).
Таким образом, функционально-морфологические исследования показали, что лазерное воздействие индуцировало определённые изменения в регуляторных структурах. Увеличение объёмов клеток и появление в них вакуолей связано с усиленным выведением образующихся в этих клетках нейропродуктов в сосу-дистое русло и активацией периферических эндокринных желёз.
Полученные нами результаты согласуются с гипотезой А.Л. Поленова (1979, 1980), согласно которой стрессорные ситуации мобилизуют все защитные меха-низмы организма, реализуемые гуморальным путём вследствие взаимодействия пептидных и моноаминовых нейрогормонов. Отмеченная повышенная реактив-ность СОЯ гипоталамуса по сравнению с ПВЯ является отражением его большой причастности к регуляции половой функции организма.
Глава 5. Патофизиологическое обоснование и особенности лазерной терапии в гинекологии
Наши исследования выявили определённую закономерность реакций нейро-эндокринных механизмов на лазерное освечивание в зависимости от исходного функционального состояния. Возникло предположение, что этот феномен легче проследить в более просто устроенных эффекторных органах – яичниках и матке, деятельность которых регулируется центральными структурами. В результате исследований было выяснено, что у интактных животных лазерное освечивание приводило к морфофункциональным изменениям в эндометрии, свидетельству-ющим об активации овариального гормонопоэза. После 10 сеансов у крыс повы-шалось содержание РНК в эндометрии, что указывало на усиление эстрогенной активности. Лазерное воздействие на фоне активации функционального состоя-ния яичников (постоянный эструс) стимулировало гиперпластические процессы в эндометрии, количество РНК резко возрастало к 10-му сеансу.
Лазерное освечивание для корреляции гипоэстрогенного состояния носило репаративный характер. Функциональное состояние яичников имело тенденцию
к восстановлению. Об этом можно было судить по значительному возрастанию РНК в эндометрии, которое до этого было снижено вследствие длительного анэс-труса, сопровождающегося атрофическими изменениями во влагалище (рис. 5.1).
Рис. 5.1. Динамика изменения содержания РНК в цитоплазме клеток эндометрия крыс
с анэструсом на фоне лазерной терапии и без неё. Содержание РНК определяется как произведение средней оптической плотности цитоплазмы клеток на её средний объём
Наши исследования выявили зависимость характера овариального гормо-нопоэза от лазерного воздействия. Использование НИЛИ для восстановления функции яичников возможно только в определённых случаях. Состояния, сопро-вождающиеся патогистологическими изменениями в эндометрии, следует считать противопоказанными к лазерному освечиванию (по крайней мере, в указанных режимах), поскольку длительная интерорецептивная стимуляция гормонозависи-мого органа в этом функциональном состоянии только усугубит морфологические перестройки.
Лазерная терапия в акушерстве и гинекологии
Дальнейшие исследования дополнили полученную ранее информацию о зако-номерностях перестроек в репродуктивной системе под влиянием лазерного ос-вечивания на центральные отделы регуляторной цепи. Так, было показано, что в овариально-маточном комплексе к 10-му сеансу отчётливо появлялись признаки ак-селерации гормонопоэза, в то время как в центральных отделах регуляции явления активации наблюдались уже к 5-му сеансу [Серов В.Н. и др., 1988]. Этот феномен подчёркивает необходимость проведения во время курса лазерной терапии диаг ностики, позволяющей контролировать состояние центральных специфических комплексов, которые в первую очередь реагируют на данный физический фактор.
Экстраполируя экспериментальные данные на клинический уровень, можно сказать, что лазерное освечивание оправдано для стимуляции менструальной функции, когда не исчерпаны компенсаторные возможности гипоталамо-гипо-физарного комплекса к секреции либеринов. Поскольку воздействие на гонады осуществляется через изменения функционирования центральных механизмов регуляции, то и перед, и после использования лазерной терапии необходимо проведение исследований, оценивающих состояние специфических образований диэнцефальной области, а также, очевидно, функции эпифиза, который является важным компонентом нейрогуморального ансамбля регуляции функции яични-ков. Применение ЛТ на фоне сформировавшихся патогистологических пере-строек в функциональных элементах может привести к усугублению развития нейрогормональных дисфункций.
Исходя из этого нами была предпринята попытка идентифицировать функцио нальное состояние эпифиза на фоне лазерного воздействия. Количество вакуо-лей, отражающих секреторный процесс в клетках эпифиза, вычисляли в 1 мм2 плоскости среза. Для оценки уровня нуклеинового обмена в эпифизе проводили на микроспектрофотометре сканирование срезов по всей поверхности эпифиза (3 линии сканирования зондом площадью 0,2 мкм 2). Метаболическая активность ядер пинеалоцитов оценивалась по изменению их объёма, концентрации и содер-жания в них ДНК, количеству вакуолей в цитоплазме.
В результате дальнейших исследований было выявлено, что в контрольной группе крыс в эпифизе выявлялись два типа клеток: тёмные и светлые. Светлые клетки больше располагались в центре железы, тёмные – по периферии органа.
В кариоплазме отмечалось небольшое количество ДНК. У крыс после одноразо-вого освечивания (зона входа во влагалище) существенных изменений в струк-турной организации эпифиза не наблюдалось. В 3-й группе (5 дней освечивания) обнаружены существенные перестройки в структурной организации эпифиза. Концентрация суммарных нуклеиновых кислот (НК) в структурах эпифиза воз-растала. Объём эпифиза, цитоплазмы пинеалоцитов и ядер значительно умень-шались. Плотность вакуолей в пинеалоцитах, диаметр капилляров не изменялись. Такая морфологическая картина оценивалась как накопление, депонирование биологически активных веществ в структурах железы, соответственно, снижение функциональной активности органа.
У крыс после 10 дней освечивания несколько ослабевала окраска клеток, кон-центрация НК несколько снижалась. Плотность вакуолей в цитоплазме клеток
Глава 5. Патофизиологическое обоснование и особенности лазерной терапии в гинекологии
возрастала. Объёмы эпифиза, его клеток и их ядер имели тенденции к возраста-нию. Увеличивался и диаметр капилляров. Эта структурно-функциональная орга-низация была оценена как начало активации секреторной деятельности железы.
После 15 дней освечивания морфологическая картина менялась. Плотность вакуолей возрастала в 3 раза, концентрация НК в клетках снижалась почти в
3 раза. Увеличивался объём эпифиза, его клеток. Значительно был расширен диаметр капилляров (в контроле – 5 мкм, на 5-й день – 8 мкм, на 10-й – 11,5 мкм, на 15-й – 14 мкм). Такая гистохимическая картина идентифицировалась нами как значительная активация секреторной функции железы.
Можно заключить, что при активации рецепторов влагалища НИЛИ эпифиз реагировал фазными изменениями структурных особенностей в зависимости от длительности освечивания. На 5-й день воздействия в нём развивались тормоз-ные процессы, а на 10–15-й день, наоборот, происходило повышение активации секреторной деятельности. При этом следует подчеркнуть, что наиболее выра-женная реакция в обеих фазах наступала со стороны трофически-транспортного компонента (отростки клеток), и вероятно, является проявлением общей зако-номерности реагирования эндокринных органов на стрессорные воздействия.
Полученные данные коррелируют с результатами исследований В.И. Грищенко (1979), в которых было показано в клинических условиях, что лазерная терапия при дисфункциональных маточных кровотечениях обеспечивает снижение про-дукции мелатонина в течение 5–7 дней, тем самым способствуя восстановлению продукции гипоталамических нейрогормонов, что в конечном счёте приводит к восстановлению менструальной функции.
В дальнейшем мы провели сравнение результатов воздействия непрерывным НИЛИ красного спектра (ГНЛ, длина волны 633 нм) и импульсным ИК НИЛИ (длина волны 890 нм) на диэнцефальную область и органы репродуктивной сис-темы животных [Жуков В.В. и др., 2016].
Крысы-самки находились как в интактном состоянии, так и в эксперименталь-ных моделируемых условиях. Программа исследований состояла из 2 этапов: 1-й – моделирование астенического состояния подопытных крыс, 2-й – проведе-ние на этом фоне освечивания НИЛИ и оценка его эффективности по морфофунк циональным показателям, регистрируемым после завершения курса.
Для индукции астенического состояния и сниженной резистентности организ-ма крыс использовали метод хронического стрессирования путём их длительного (в течение 1 месяца) ежедневного содержания в клетках-пеналах (по 8 часов в сутки) в условиях ограниченной двигательной активности. Стрессовый эффект усиливался снижением содержания воды в рационе питания. Цитофотометриче ские исследования мозга и овариально-маточного комплекса животных проводили
с помощью прибора МЦФУ «ЛОМО» общепринятым методом [Агроскин Л.С., Папаян М.В., 1977]. Контролем служили материалы от интактных крыс того же возраста.
Для красного непрерывного НИЛИ плотность мощности была 100 мВт/см2, экспозиция 2 мин, для ИК-лазера – импульсная мощность 2,5 Вт, частота сле-дования импульсов 3000 Гц, экспозиция также 2 мин. Курс освечивания состо-
Лазерная терапия в акушерстве и гинекологии
ял из 5 сеансов, проводимых ежедневно в одно и то же время. Лазерный луч направлялся на слизистую носа во время пребывания крыс в клетках-пеналах. Как известно, слизистая носа отличается высокой плотностью рецепторных сен-сорных полей, поэтому вероятнее всего, что физический фактор реализует свой биологический эффект на центральные нейроэндокринные интеграции через афферентную стимуляцию соответствующих дендритов нейронов, активацию микроциркуляторных процессов [Жуков В.В. и др., 2016].
Выбор указанных параметров НИЛИ обусловлен тем, что они являются наибо-лее распространёнными в терапевтической практике и реализуются большинс-твом из многочисленных физиотерапевтических комплексов.
На 1-м этапе, как уже говорилось, изучали морфофункциональные измене-ния, которые возникали при моделировании у крыс астенического состояния. Было обнаружено, что содержание крыс в указанных условиях сопровождалось морфологическими перестройками как в периферических, так и в центральных эндокринных интеграциях. Имела место тенденция к снижению содержания примордиальных и созревающих фолликулов, во многих зрелых фолликулах цитоплазма была лизирована, ядра сморщенной формы. Атретические фолликулы характеризовались многослойной гранулёзной оболочкой с явлениями пикноза ядер. Молодые жёлтые тела не выявлялись.
У крыс была удлинена фаза диэструса, а у некоторых наступало состояние анэструса. В эндометрии матки обнаруживалось значительное уменьшение ма-точных крипт. В них происходили уплощение призматических клеток и появле-ние атрофических изменений покровного эпителия. Размеры матки и её масса уменьшались.
Цитофотометрическое исследование показало снижение содержания суммар-ных НК в клетках эндометрия, что указывало на сниженную секрецию гормонов яичников (интактная группа – 560,5 ± 4,5 отн. ед., опытная – 405,2 ± 3,6 отн. ед.). Учитывая центральный принцип регуляции функции яичников, можно было за-ключить, что наблюдаемые морфофункциональные изменения имели вторичный характер, обусловленный аномалиями в работе высших вегетативных комплек-сов. Для изучения этих явлений были проведены дальнейшие гистохимические исследования.
При рассмотрении структур СОЯ и ПВЯ гипоталамуса, принимающих участие
в регуляции адаптационных реакций, было обнаружено, что по истечении месяца эксперимента в нейронах указанных ядер значительно возрастало количество нейросекреторного вещества (НСВ) в цитоплазме. В то же время размеры кле-ток уменьшались. В клетках СОЯ происходило более интенсивное, чем в ПВЯ, накопление НСВ в цитоплазме нейронов.
Обнаруженные оптико-структурные изменения свидетельствуют о том, что
в крупноклеточных ядрах гипоталамуса (СОЯ, ПВЯ) секреторная активность тормозилась, следовательно, в русло крови биологически активные вещества поступали в меньшем количестве. Более интенсивные сдвиги по сравнению с контролем происходили в структуре СОЯ, где особенно значительно уменьшались объёмы нейронов. Изложенные данные указывают на значительное угнетение секреторной активности рассматриваемых нейроэндокринных интеграций.
Глава 5. Патофизиологическое обоснование и особенности лазерной терапии в гинекологии
Для более подробного анализа состояния нейрогуморальных механизмов, обеспечивающих координацию ритмичности эндокринного гомеостаза, анализи-ровали состояние базофилов аденогипофиза, клеток, участвующих, как известно, в индукции секреции фолликулостимулирующего гормона, усиливающего, в свою очередь, продукцию эстрогенов в яичниках. Было обнаружено, что на фоне хронического стресса происходило депонирование НСВ в цитоплазме базофилов аденогипофиза, их объёмы значительно уменьшались (2125 ± 12,7 мкм3 в контро-ле и 1368,2 ± 9,2 мкм3 после моделирования патологического процесса, р < 0,05).
Отмеченные признаки указывали на сниженную функциональную активность базофилов, и следовательно, угнетение гормонопродукции яичников. Как извест но, сниженная активность периферических эндокринных желёз является одним из характерных признаков астено-вегетативного синдрома в клинике.
Определённая роль в развитии постстрессовых реакций придаётся эпифизу, который участвует в организации биоритмологических процессов, в этиологии патологии репродукции и сезонной депрессии. Учитывая, что эпифиз находится в реципрокных отношениях с гипоталамо-гипофизарной интеграцией в аспекте её влияния на репродукцию, были проведены исследования основных функциональ-ных элементов эпифиза – пинеалоцитов в плане интенсивности их вакуолизации как индикатора секреторной активности. Было выяснено, что в пинеалоцитах крыс, находящихся в состоянии стресса, количество вакуолей и процент клеток с явлениями вакуолизации возрастали, а это указывало на повышенную функцио нальную активность органа (количество пинеалоцитов с вакуолями в контроле 71,5 ± 3,3%, на фоне стресса – 40,2 ± 2,4%).
Таким образом, морфофункциональные исследования показали, что модели-руемое состояние сопровождалось основными патогенетическими признаками астено-вегетативного синдрома. Следовательно, избранный приём моделирования был адекватен для решения следующего этапа – изучения изменения в нейроэн-докринных интеграциях на фоне моделируемого процесса при его эксперимен-тальном освечивании НИЛИ.
Указанные выше источники лазерного света применялись на фоне как интакт ного состояния животных, так и индуцированных астенических перестроек (3-я группа). Тест -объектом для проведения сравнительного анализа служили объёмы нейронов СОЯ и ПВЯ как первичного звена рефлекторного ответа на физический стимул и эндометрий как морфологически относительно просто устроенную ткань, имеющую чёткую связь с высшими регуляторными структу-рами. Как известно, структура эндометрия и содержащиеся в нём биологически активные вещества (НК) перестраиваются синхронно с колебаниями секреторной деятельности центральных образований.
Было показано, что под влиянием НИЛИ как красного, так и ИК-спектров
в ПВЯ и СОЯ интактных крыс возникали нерезко выраженные признаки уси-ления секреторной продукции. Реакция СОЯ и ПВЯ имела сходный характер. Более резко выраженная цитологическая перестройка имела место под влиянием излучения импульсного ИК-лазера, объёмы нейронов СОЯ и ПВЯ возрастали более значительно (под влиянием излучения ИК-лазера почти на 30%, красно-
Лазерная терапия в акушерстве и гинекологии
го НИЛИ – 18%). При изучении содержания НК в эндометрии существенных изменений обнаружено не было (наблюдалась лишь тенденция к возрастанию). Видимо, при исходно нормальном функционировании эндокринных комплексов используемые параметры НИЛИ не вызывали резких пролиферативных реакций, что указывало на относительно мало меняющуюся гормональную продукцию в репродуктивной системе подопытных крыс.
В дальнейшем указанные варианты лазерного воздействия применялись на фоне моделируемого патологического процесса при тех же параметрах НИЛИ.
В данном случае контролем служили животные, которые после месячного содер-жания в условиях моделируемого эксперимента подвергались имитационному воздействию (плацебо), как и при реальном курсе сеансов воздействия НИЛИ. По его завершении те же ткани брались на гистохимическое исследование.
Было обнаружено, что в этих условиях имели место очевидные изменения морфологических показателей по сравнению с таковыми, регистрируемыми у контрольных животных. Особенно резкая клеточная реакция возникала при при-менении импульсного ИК-лазера. Как и ранее, более резкие перестройки имели место в СОЯ, что указывало на его большую чувствительность к физическому фактору. Вследствие центральных перестроек значительные изменения происхо-дили и в картине эндометрия, что сопровождалось значительным возрастанием концентрации НК. Полученные результаты морфофункциональных исследований свидетельствовали о том, что используемые параметры НИЛИ способствовали процессу восстановления гомеостаза. По сравнению с непрерывным НИЛИ крас-ного спектра импульсное ИК НИЛИ индуцировало более выраженные реакции. Регистрируемые показатели при этом приближались к таковым, наблюдаемым у интактных животных.
Более выраженный биостимулирующий эффект ИК-лазера можно объяснить, в частности, импульсным режимом его работы. Как известно, стимулы преры-вистого характера любой природы вызывают более экспрессивные реакции, чем монотонное раздражение рефлексогенных зон. Можно предположить, что помимо активации рецепторных зон слизистой носа НИЛИ через оптико-вегетативные связи может также вмешиваться в интрацентральные корреляции между гипо-физом и эпифизом. Это отражается на секреции гипоталамических рилизинг-гормонов, для которых продукты секреции эпифиза являются антагонистическим началом. В пользу этого предположения говорят данные наших исследований об изменениях в клетках эпифиза при воздействии НИЛИ на рефлексогенные зоны
[Жуков В.В. и др., 1987].
По нашему мнению, можно аргументированно считать, что механизм терапев-тического действия НИЛИ заключается в восстановлении нейросекреторной де-ятельности гипоталамо-гипофизарного комплекса, обусловливающей нормализа-цию нейроэндокринного гомеостаза организма, перенесшего длительный стресс.
Помимо освечивания рефлексогенных зон на поверхности тела НИЛИ в аку-шерстве применяют неинвазивное лазерное освечивание крови на проекции крупных сосудистых стволов на коже. Так, В.А. Мельников (1989) приводит данные о возможности использования излучения ГНЛ для метаболической и
Глава 5. Патофизиологическое обоснование и особенности лазерной терапии в гинекологии
гемоциркуляторной коррекции фетоплацентарной системы при развивающейся гипотрофии плода. С этой целью световой поток направляли на участок кожи передней брюшной стенки, находящейся над местом прикрепления плаценты
в матке. В результате курсового воздействия были диагностированы гемоди-намические, метаболические эффекты. В частности, имело место увеличение наполнения пульса и интенсивности кровообращения, снятие спазма артериол. Лабораторно регистрировали положительную динамику плацентарных гормонов, уменьшение внутрисосудистой агрегации форменных элементов крови, про-изошло ускорение темпов прироста фетометричеких показателей и исчезновение признаков дистресса плода.
Таким образом, большинство данных об использовании НИЛИ в акушерско-гинекологической практике базируется на материалах работ, связанных с при-менением этого фактора в коррекции нейроэндокринных нарушений функции яичников, а также воспалительных поражений репродуктивных органов.